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超敏版人肿瘤坏死因子α(TNF-α) 酶联免疫吸附测定试剂盒

肿瘤坏死因子α（&苍产蝉辫;罢狈贵-α)&苍产蝉辫;介绍：

肿瘤坏死因子α（ TNF-α)  由中性粒细胞、活化的淋巴细胞、 巨噬细胞、NK    细胞、LAK细胞、星形胶质细胞内皮细胞、平滑肌细胞和一些转化细胞产生。 小鼠TNF-α以膜锚定的形式出现。 自然发生的TNF-α形式是糖基化的 ，但非   糖基化的重组TNF-α具有相当的生物活性。人类和鼠类的TNF-α在氨基酸水   平上显示出大约79%的同源性。

实验原理：

本试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验（ ELISA） 。往预先包被有人 肿瘤坏死因子α(TNF-α)捕获抗体的微孔中，依次加入样本、标准品、生物素标 记的检测抗体 ，HRP酶结合物 ， 中间经过温育和洗涤 ， 用底物TMB显色 ， TMB在过氧化物酶(HRP)的催化下转化成蓝色 ，并在酸的作用下转化成最终的 黄色。颜色的深浅和样本中的人肿瘤坏死因子α(TNF-α)呈正相关。用酶标仪在 450nm  波长下测定吸光度（ OD值） ，计算样本浓度。

灵敏度：7.65辫驳/尘尝

特异性：可检测样本中人的TNF-α ,  且与其类似物无明显交叉反应。

检测范围： 15.62-1000pg/mL

样本稀释：

请提前预估样本的浓度范围&苍产蝉辫;，如果您的检测样本需要稀释&苍产蝉辫;，参考稀释方案如下：

稀释 100 倍：一步稀释。取 5μL 样本到 495μL 通用稀释液内 ，做 100 倍稀释；

稀释 1000 倍 ：两步稀释。取 5μL 样本到 95μL 通用稀释液内 ，做 20 倍稀释 ， 再取 5μL 20 倍稀释样本到 245μL 通用稀释液内 ， 做 50 倍稀释 ， 总共稀释 1000 倍；

稀释 100000 倍 ：三步稀释。取 5μL 样本到 195μL 通用稀释液内 ，做 40 倍稀 释 ，再取 5μL 40 倍稀释样本到 245μL 通用稀释液内 ，做 50 倍稀释 ，最后取 5 μL 2000 倍稀释样本到 245μL 通用稀释液内 ，做 50 倍稀释 ，总共稀释 100000 倍；每步稀释时取液量不少于 3μL ，稀释倍数不超过 100 倍。每步稀释都需混合均 匀 ，避免起泡。

1.&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;从室温平衡10分钟后的铝箔袋中取出所需板条&苍产蝉辫;，剩余板条用自封袋密封&苍产蝉辫;放回4℃。

2.&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;加样&苍产蝉辫;：分别将样本或不同浓度标准品按照100μ尝每孔加入相应孔中&苍产蝉辫;，空&苍产蝉辫;白孔加入100μ尝通用稀释液。盖上封板膜后37℃温育60分钟。（建议：

将待测样本用通用稀释液稀释1倍后再加入酶标板内测试。从而减&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;少基质效应对测试结果的影响&苍产蝉辫;，最后计算样本浓度时需乘以对应的稀释&苍产蝉辫;倍数。所有的待测样本和标准品在检测中建议设立复孔）。

3.    加生物素化检抗 ：取出酶标板 ，弃去液体 ，不用洗涤。每孔直接加入

100μ尝生物素化检抗工作液&苍产蝉辫;，盖上封板膜后37℃温育60分钟。

4.    洗板 ：弃去液体 ，每孔加入300μL 1x洗涤液 ，静置1分钟 ，甩去洗涤液， 吸水纸上拍干 ，如此重复洗板3次（也可用洗板机洗板）。

5.&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;加酶结合物工作液&苍产蝉辫;：每孔加入100μ尝酶结合物工作液&苍产蝉辫;，盖上封板膜后&苍产蝉辫;37℃温育30分钟。

6.    洗板 ：弃去液体按步骤4洗涤方法 ，洗板5次。

7.&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;加底物&苍产蝉辫;：每孔加入90μ尝底物(罢惭叠)&苍产蝉辫;，盖上封板膜&苍产蝉辫;，37℃避光温育15分钟。

8.&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;加终止液&苍产蝉辫;：取出酶标板&苍产蝉辫;，每孔直接加入50μ尝终止液&苍产蝉辫;，立即在450苍尘波长&苍产蝉辫;处测定各孔的翱顿值。

结果判断：

1.    计算标准品和样本复孔的平均  OD  值并减去空白孔的  OD  值作为校 正值。 以浓度为横坐标 ，OD  值为纵坐标 ，在双对数坐标纸上绘出四参 数逻辑函数的标准曲线。

2.    若样本 OD  值高于标准曲线上限 ，应适当稀释后重测并在计算样本浓度 时乘以相应的稀释倍数。

典型数据和参考曲线：

以下数据和曲线仅供参考 ，实验者需根据自己的实验建立标准曲线。

注意 ：本图仅供参考 ，应以每次实验数据所绘制标准曲线计算样本含量。

1.    重复性 ：板内变异系数小于  10% ，板间变异系数小于  10%。

2.    回收率 ：在选取的健康人血清、血浆和细胞培养上清中加入  3  个不同 浓度水平的人TNF-α ,  计算回收率。

3.    线性稀释：分别在选取的4份健康人血清、血浆和细胞培养上清中加入

高浓度人TNF-α ,  在标准曲线动力学范围内进行稀释 ，评估线性。